SELEÇÃO DE INIBIDORES QUÍMICOS ESPECÍFICOS DA ENZIMA CONIFERALDEÍDO DESIDROGENASE

Abstract

O ácido ferúlico (FA) interliga os polímeros da parede celular diminuindo a atividade de hidrolases. O FA é um importante intermediário na constituição da biomassa lignocelulósica, a qual é apontada como uma promissora matéria-prima para produção de bioetanol. O FA é produzido pela oxidação do coniferaldeído, numa reação catalisada pela coniferaldeído desidrogenase (CALDH). Este trabalho teve como objetivo testar, in vitro, inibidores da CALDH visando reduzir o conteúdo de FA e aumentar a acessibilidade de hidrolases aos polissacarídeos da parede. Sementes de milho (Zea mays L.) foram germinadas no escuro (72 h, 25ºC), 25 plântulas uniformes foram mantidas em hidroponia por 24 h. Para determinação da atividade enzimática, foram macerados 2 g de raízes frescas em tampão de extração. O homogeneizado foi centrifugado (2.200 ×g, 30 min, 4ºC). As proteínas foram precipitadas por saturação com sulfato de amônio a 70%. A solução foi centrifugada (15 min), e o pellet ressuspendido com tampão de extração foi considerado o extrato enzimático. A reação foi iniciada com a adição de substrato e mantida a 40°C por 10 min. O produto da reação foi analisado a 330 nm por HPLC. Os ensaios enzimáticos foram conduzidos na presença de dissulfeto de tetraetiltiuram, ácido rosmarínico e trans-chalcona, numa concentração similar a do substrato (30 μM). Todos estes compostos inibiram a atividade da enzima em cerca de 20% sugerindo que eles podem, possivelmente, ser usados para reduzir a recalcitrância da parede celular.