COMPARAÇÃO ENTRE DOIS MÉTODOS DE EXTRAÇÃO DE DNA DE Leifsonia xyli subsp. xyli

Abstract

Responsável por ocasionar perdas de até 30% da produtividade, o raquitismo-da-soqueira causado pela bactéria Leifsonia xyli subsp. xyli, é uma das doenças mais importantes para a cultura da cana-de-açúcar. O objetivo deste trabalho foi comparar dois métodos de extração de DNA da bactéria Leifsonia xyli subsp. xyli afim de formular uma resposta rápida sobre a presença da doença em áreas de cana-de-açúcar, visto que a mesma não apresenta sintomas típicos. Foram coletadas amostras de cana-de-açúcar de áreas sabidamente infestadas com a doença. Foi coletado o colmo mais velho da touceira a ser amostrada e a seiva foi extraída com o auxílio de um espremedor de limão. A extração do DNA total foi realizada a partir do caldo extraído e seguindo protocolo específico para a bactéria elaborado por Gao et al. (2008) com modificações, e também de acordo com protocolo CTAB adaptado e modificado de Murray e Thompson (1980), que é um método comum de extração de DNA. Após a extração as amostras foram submetidas à amplificação por meio de PCR convencional e o produto analisado em eletroforese com gel de agarose a 1% corado com brometo de etídio. O produto da amplificação foi revelado em fotocumentador equipado com luz ultravioleta e filtro de brometo. O experimento foi repetido três vezes e o resultado encontrado foi o mesmo em todas as repetições. Os resultados foram analisados com base na presença de bandas no gel e indicaram que a extração e amplificação é mais eficaz quando se faz uso de protocolo geral, como o CTAB, do que quando se utiliza protocolo específico para a bactéria em estudo. Desta forma, admite-se que o método de extração CTAB é o método mais eficaz para extrair o DNA da bactéria Leifsonia xyli subsp. xyli, embora não seja específico para a mesma.