IDENTIFICAÇÃO MOLECULAR DE CANDIDA SPP. EM AMOSTRAS DE PACIENTES COM CÂNCER BUCAL POR MEIO DE PCR - MULTIPLEX

Abstract

O objetivo da presente pesquisa será identificar Cândida spp. em amostras de pacientes diagnosticados com câncer bucal e que frequentam a Clínica Odontológica da Unicesumar – Centro Universitário Cesumar, Maringá – PR por meio de PCR – multiplex. A amostragem será feita através da raspagem da mucosa bucal com swab estéril e descartável, seguida pelo isolamento asséptico em placas de Petri com ágar Saubourand. O DNA para amplificação será extraído pelo método fenol-clorofórmio a partir das culturas das espécies de Cândida, em seguida passará pela quantificação por meio da corrida em eletroforese em gel de agarose corado com brometo de etídeo. A identificação ao nível de espécies de Candida será baseada na reação em cadeia da polimerase – PCR por nested-multiplex com touchdown, na qual o primeiro round utilizará os primers universais ITS1 e ITS4 e o segundo round, caracterizado como espécie –específico com os primers para C. albicans (CALB), C. tropicalis (CTR), C. glabrata (CGL), C. krusei (CKR), C. parapsilosis (CPAR). Por fim, será realizada uma corrida eletroforética para a visualização dos resultados da amplificação por PCR e posterior análise estatística. Espera-se, com estes resultados, distinguir as espécies de Candida por meio PCR – multiplex e verificar a prevalência em pacientes com câncer bucal.