EVENTOS Mostra Interna de Trabalhos de Iniciação Científica XII Mostra Interna de Trabalhos de Iniciação Científica e V Mostra Interna de Iniciação em Desenvolvimento Tecnológico e Inovação

Tipo:	Artigo de Evento
Título:	DESENVOLVIMENTO DE TÉCNICAS DE EXTRAÇÃO E PURIFICAÇÃO DE DNA EM AMOSTRAS ESCASSAS APLICADAS À CIÊNCIA FORENSE
Autor(es):	Martins, Ana Paula de Sá Ferreira Emerick, Anna Beatriz Araujo, Mariane Castardo
Resumo:	A ciência forense pode ser definida como um conjunto de pesquisas que estuda os vestígios presentes em um caso através de sua detecção, reconhecimento, recuperação, análise e interpretação; o que entra em conformação com o artigo 158 do Código do Processo Penal (CPP), o qual aborda a área da Perícia Oficial Brasileira de Natureza Criminal e os encargos concedidos ao perito criminal. A Genética Forense analisa os vestígios de origem biológica como sangue, sêmen, saliva, entre outros, com o objetivo da identificação humana, tendo a extração como principal método de acesso ao DNA no núcleo das células, um processo decisivo que demanda a escolha de um bom protocolo para a obtenção do máximo de informação possível, já que o tipo, a quantidade e o estado de conservação do material obtido influenciam a análise posterior. Em cenas de crime a disponibilidade de vestígios biológicos é geralmente muito limitada, dificultando a obtenção do DNA, pois muitos protocolos de extração requerem uma maior quantidade de tecido disponível, e os Kits utilizados são de alto custo. Portanto faz-se necessário o desenvolvimento de mais protocolos de extração voltados a pequenas quantidades de amostra, a fim de auxiliar as investigações criminais e assegurar que evidências de cunho biológico se tornem mais precisas, garantindo sua exatidão e credibilidade em sua aplicação jurídica. Objetivo: Padronizar um método de extração de DNA in-house, que possa ser aplicado de maneira eficiente na análise de amostras de quantidade muito limitada, frequentemente encontradas por peritos criminais em locais de investigação, através da adaptação do método de salting-out. Metodologia: A metodologia para extração de DNA de gotas de sangue será realizada através de uma adaptação do protocolo de extração por salting-out desenvolvida por Gaaib et al. (2010). A técnica consistirá em coletar gotículas de sangue de voluntários a partir de punção digital, realizar uma lise inicial de eritrócitos a partir de um tampão (RBCL), centrifugação para eliminação dos eritrócitos lisados, lise de leucócitos a partir de outro tampão (WBCL), lise de proteínas com Proteinase K, suspensão de proteínas com NaCl, e purificação com isopropanol P.A. e etanol 70%. A metodologia para extração de DNA de amostras de tecido epitelial será desenvolvida através de uma adaptação do protocolo realizado por Araujo et al. (2021). Na técnica, serão coletadas células do epitélio com auxílio de escova cervical estéril, e as células serão suspensas em tampão TE com auxílio de vórtex. Em seguida o material será centrifugado e ao pellet será adicionado o tampão de lise (Proteinase K, SDS, água). O material descansará em banho-maria e em seguida será adicionado NaCl 5M e realizada nova centrifugação. O sobrenadante será recuperado e serão realizadas as lavagens com etanol absoluto e 70%. O DNA obtido será suspenso em TE. A análise dos resultados será realizada em três etapas, sendo a primeira a eletroforese em gel de agarose a 1%, a segunda será a análise por espectrofotometria em comprimento de onda de 260 - 280 nm, conforme descrito por Gaaib et al. (2010), e em seguida será realizada uma PCR do gene da β-globina para testar parâmetros, utilizando o protocolo de Bell et al. (1993). Resultados esperados: Espera-se por meio deste estudo, a padronização de um protocolo de extração para a obtenção de um material genético de qualidade advindo de amostras escassas que possa ser aplicado nas demais técnicas da ciência forense como Southern Blotting, PCR quantitativa, PCR Multiplex, Nested PCR e Sequenciamento de Nova Geração, proporcionando uma análise mais confiável do material genético de cena de crime para auxiliar nas investigações, assegurando que evidências de cunho biológico tornem-se mais vantajosas na identificação de suspeitos, vítimas, e demais situações necessárias. Além disso, espera-se diminuir os custos desse procedimento, a fim de abranger o máximo das condições propostas por artigos de uma técnica de extração ideal, a qual deve otimizar o rendimento do DNA, minimizar sua degradação, e ser acessível em termos de trabalho, custo, tempo e materiais. Através de outros procedimentos laboratoriais de biologia molecular como espectrofotometria, eletroforese em gel de agarose e PCR, pretende-se atestar a integridade, pureza e concentração dos resultados obtidos no processo de extração. Na espectrofotometria de massa é possível realizar a quantificação de maneira eficiente e rápida do DNA obtido através da absorção de energia pelas bases nitrogenadas da molécula, as quais levam a um pico em torno de 260 nm em casos de alta massa molecular; também é possível monitorar a desnaturação da fita através desse método devido ao maior poder de absorção do DNA de fita simples em comparação com o de fita helicoidal. Além disso, utilizando a relação entre o padrão de absorbância de proteínas, e o padrão de absorbância do DNA na região do ultravioleta, é possível avaliar a pureza da extração realizada, sendo que a presença de proteínas tende a reduzir os valores das razões. Com a PCR, espera-se que haja a amplificação de material para confirmar a presença de fragmentos de DNA no resultado final da extração; e na eletroforese em gel de agarose, o aparecimento de fragmentos corados (bandas) no gel ao ser submetido a luz UV, evidencia a presença de material genético, além de possibilitar a avaliação do tamanho das moléculas de DNA pela comparação com um marcador de peso molecular, e da quantidade de material pela intensidade luminosa da “banda” de DNA.
Palavras-chave:	Biologia molecular Genética forense Perícia criminal
Idioma:	por
País:	Brasil
Editor:	UNIVERSIDADE CESUMAR
Sigla da Instituição:	UNICESUMAR
Tipo de Acesso:	Acesso Aberto
URI:	http://rdu.unicesumar.edu.br/handle/123456789/11434
Data do documento:	30-Jan-2025
Aparece nas coleções:	XII Mostra Interna de Trabalhos de Iniciação Científica e V Mostra Interna de Iniciação em Desenvolvimento Tecnológico e Inovação

Os itens no repositório estão protegidos por copyright, com todos os direitos reservados, salvo quando é indicado o contrário.